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ゲル電気泳動

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物理分析電気泳動

大きさに依存して分離する方法である。高分子化合物の分離に適している。
アガロースゲル電気泳動とポリアクリルアミドゲル電気泳動がある。
ゲル電気泳動法では、主にイオンの分子量(サイズ)により物質を分離する。電荷はほとんど影響しない。

【アガロースゲル電気泳動】

核酸の分離に利用される。
核酸は負の電荷を有するため陽極へ移動する。
小さい核酸ほど移動速度が速い。

【ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)】

ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、ゲルの網目構造を利用して分子量の違いで分離をする方法である。
タンパク質に還元剤を加えて、S-S結合を還元して切断したのち、SDSを加えて陰イオン性を持たせて泳動する。
ゲル電気泳動では分子の立体構造の違いが移動度に影響を与えるため、あらかじめ2-メルカプトエタノールなどの還元剤を用いてタンパク質内のS-S結合を切断し、3次元構造を破壊した後に分離を行っている。
SDSは、分子内に疎水基と陰イオン性の親水基をもつ陰イオン界面活性剤であり、分子量に応じて負の電荷を持たせる。タンパク質のアミノ酸残基2~3個に対し、SDS1個が結合する。

【SDS-PAGEのポイント】

・SDSは陰イオン性界面活性剤である。
・SDSとアミノ酸残基の結合比は約1:2。
・タンパク質は陽極へ移動する。
・小さいタンパク質ほど移動速度は速い。



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